RIPA(Radio Immuno Precipitation Assay) buffer는 western blot 또는 immunoprecipitation(면역 침강 검사)를 수행할 때 주로 사용됩니다. RIPA buffer는 세포를 용해시키고 배양된 세포로부터 단백질을 추출하기 위해 사용됩니다. RIPA buffer cell lysis(세포 용해)를 통해 단백질 농도를 측정할 수 있습니다. RIPA buffer는 세 가지 비이온성 및 이온성 계면활성제를 함유하고 있기 때문에 이상적인 세포 용해 시약입니다.

단백질-단백질 상호 작용을 보존하거나 변성을 줄여야 할 경우 SDS(이온성 계면활성제) 또는 Triton X-100(비이온성 계면활성제)을 사용하지 않는 RIPA buffer 레시피를 사용하는 것이 좋습니다.

1.  세포를 얼음처럼 차가운 PBS로 세척한다. 1,500 x G에서 마이크로 원심분리기에 세포를 5분간 회전시켜 cell media를 제거한다. 흡인하여 media를 제거한다. 셀을 차가운 PBS에 재현탁시킨 후, 1,500 X G에서 5분간 원심분리한다.
2. PBS를 흡인한다.
3. 차가운 RIPA Buffer (107 세포 당 약 1ml)를 첨가한다.
4. 멸균된 피펫 팁을 사용하여 플레이트에서 adherent cell(부착세포)를 긁어낸다.
5. 원심력 및 시간은 세포 유형에 따라 달라질 수 있다.
6. 원심분리기에서 꺼내어 얼음 위에 보관한다.
7. 상등액을 흡인하여 새 튜브에 넣고 얼음 위에 보관한 후 펠릿을 버린다.
8. Bradford assay, a Lowry assay 또는 BCA(bicinchoninic acid)를 사용하여 단백질 농도를 측정하다. BSArk standard로 사용될 수 있다.
9. 단백질 농도가 결정되면, 샘플을 -20 °C/-80 °C에서 냉동하거나 로딩 준비를 할 수 있다.

1. 시료를 적정 농도로 normalise한다.
2. 단백질을 변성시켜 Lameli buffer를 사용하여 항체를 검출할 수 있도록 한다.
3. 95°C에서 5분간 heat block한다.
4. Acrylamide gel에 샘플을 로딩한다.

Laemmli Buffer는 disulphide 결합을 감소시키는 역할을 하는 beta-2-mercaptoethanol을 함유하고 있으며, 이는 단백질을 변성시킵니다. 또한 Laemmli buffer에는 gel electrophoresis(젤 전기영동)을 위한 음전하를 제공하는 SDS 성분과, 샘플의 밀도를 높여주는 glycerol이 포함되어 있습니다.