ELISA 데이터 계산 및 분석

사용된 ELISA의 유형(정성, 반 정량, 정량)에 따라 데이터 출력이 달라집니다. 따라서 분석하고자 하는 데이터에 따라 사용할 특정 ELISA를 선택합니다. 데이터는 시료의 로그 농도 대 광학 밀도(OD: optical density)의 플롯(plot)으로 표시됩니다. 이미 알려진 농도를 가진 표준 용액은 분석물의 농도를 결정할 수 있는 표준곡선을 생성하는데 사용됩니다.

ELISA를 수행할 때 결과의 통계적 유의성을 보장하기 위해 같은 샘플을 이중 또는 삼중으로 분석하는 것이 좋습니다.

ELISA plates를 셋업할 때, positive control 와 negative contral을 포함시킵니다.

• Negative controls : 분석물이 없는 샘플
• Positive controls : 분석물의 존재 또는 농도가 알려진 샘플

ELISA protocol을 완료 후plate reader로 샘플 및 표준물질(standards)의 분석을 마치고 나면, 표준곡선을 plot 할 수 있습니다. 표준물질의 알려진 농도(X축) 대 평균 흡광도(Y축)를 plot 하여 분석물을 위한 표준곡선을 얻습니다. 최적의 곡선을 얻기 위해 데이터 분석 시 컴퓨터를 사용하세요.

변동 계수(coefficient of variation)는 결과의 불일치 및 부정확성을 식별하는 데 도움이 됩니다. 이는 평균에 대한 분산의 백분율로 표현됩니다. 분산이 클수록 불일치와 오차가 커집니다. 변동계수(CV : coefficient variation)는 표준 편차 σ와 평균 µ의 비율입니다.

CV= σ/µ

높은 CV는 다음 중 일부 또는 전부에 기인할 수 있습니다:

• 파이펫팅 부정확성
• 박테리아/곰팡이 또는 기타 시약으로 인한 시료 오염
• 온도 변화 : 플레이트는 외기가 닿지 않는 안정적인 온도에서 배양되어야 합니다.
• Well 의 건조 : 모든 배양 단계에서 플레이트를 덮어 두어야 합니다.

Assay Genie에서는 생산하는 모든 kit의 민감성, 범위 및 분석 간/분석 내 CV(%)를 분석하고 있습니다. 당사 ELISA kit의 가변성을 비롯한 모든 특징에 대해 구매 전에 확인할 수 있습니다.

Spike recovery는 샘플 내의 어떤 성분이 항체-항원 결합에 영향을 미치는지를 확인합니다. Sample matrix에 일정 농도의 recombinant target protein(재조합 타겟 단백질)을 첨가(spike)합니다. ELISA 분석을 수행하여 표준곡선으로부터 그 단백질의 농도를 계산합니다. Recovery는 통상적으로 백분율로 표시됩니다. 80%보다 낮은 수치는 일반적으로 matrix 내 성분이 ELISA 분석에 영향을 미친다는 것을 의미하며, 이때는 다른 kit을 선택해야 합니다. 저희 ELISA genie는 ELISA kit의 정확성 표기의 필요성과, sample matrix 내의 성분이 ELISA의 중요단계인 항원-항체 반응에 영향을 미치는지 여부를 확인하는 과정의 중요성을 깊이 이해하고 있습니다. 이것이 저희가 생산하는 모든 ELISA kit batch에 대해 linearity 및 spike recovery분석을 고집하는 이유입니다.